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木质生物填料/滤料


木质生物填料/滤料

使用复合模式SPE技术去除血浆样品中的聚乙二醇400

日期:2022-09-15 09:31:42 来源:足球世界杯押注 作者:可以押注的软件

  PEG 400等药物赋形剂通常被加入到制剂中以促进其在介质中溶解。然而,这些化合物却可引发显著的基质效应,尤其是在LC/MS/MS分析中产生的离子抑制效应。常规药物研发流程中使用的快速LC梯度方法,容易导致此类化合物和目标分析物的共流出。由于这种共流出物已被证实是导致离子抑制效应的主要原因,因此在早期药代动力学(PK)研究中,赋形剂浓度偏高可能会带来棘手的问题。为尽量减少这一问题引发的不良影响,目前已研究出的方法包括:LC梯度调节。即便其中部分方法已取得成效,他们也存在各自的局限性。很显然,分析员通常无法自己选择制剂药赋形剂。无论是改变梯度或流动相,还是色谱柱的选择,LC条件的优化都能够针对部分分析物解决这一问题,但它既无法应用到全部分析物,也需要更多的方法开发作为辅助支持。同时,对LC运行条件的过多优化并不利于高通量分析。有研究人员指出, “若能开发出一种更优化的固相萃取(SPE)方法,便可实现有效的净化效果。 ”

  针对以上问题,本应用纪要通过使用Oasis复合模式阳离子交换(MCX)SPE方法提供了一种可以快速、便捷、高效的解决方案。碱性分析物通过强阳离子交换作用被吸附在填料中,而如PEG等非离子型的赋形剂则通过反相机理被吸附,同时能够在分析物洗脱之前被选择性去除。

  标准品包含:醋丁洛尔、美托洛尔、拉贝洛尔、咪达。这些成分分别加入到空白血浆中、调整其浓度至200 ng/mL,或是后加标到萃取后的空白血浆洗脱液中,用于回收率的计算。PEG400也是分别加入到空白血浆中调整其浓度到到5mg/mL或者后加标到萃取后的空白血浆洗脱液中用于确定回收率。

  样品按照Oasis®MCX的标准操作流程进行萃取。简单来说,在0.5mL兔血浆中加入0.5mL 4% H3PO4进行酸化。(注意:本研究中采用的是0.5mL血浆,采用更小剂量亦可)。MCX96孔板在经过1.0mL MeOH和1.0mL H2O活化平衡之后,经酸化的样品被上样到填料中.上样后,使用1.0mL 2%甲酸和2×1.0 mL MeOH清洗。样品使用2×250μL含5%NH4OH的MeOH溶液进行洗脱。 “后加标”(PS)样品是在空白兔血浆洗脱液中加入标准品或标准品与PEG 400的混合物。经萃取的样品则

  以以下方式制备:在未经萃取的血浆中加入200ng/mL标准品、或在其基础上再加入5 mg/mL PEG 400。

  PEG去除的回收率依据以下算式得出:% 回收率 =(萃取样品峰面积/后加标样品峰面积)×100%

  为进行PEG去除的相关分析,样品按照1:200的比例在流动相中进行稀释,以避免高浓度PEG400给质谱仪带来的污染。

  初始流动相条件为95:5 MPA:MPB。持续0.5分钟,MPB在2.5分钟之后增至90%。MPB比例随后降回5%,并持续2分钟,重新平衡色谱柱。总运行时间5.0分钟。

  PEG 400及其他四种测试化合物的色谱图如图1所示。图中宽峰是PEG400丰度较大的分子离子峰的综合TIC,包括以下分子量的PEG单峰:370、414、458、502、546、590和634。标准品(醋丁洛尔、美托洛尔、拉贝洛尔、咪达)可通过MH+离子的SIR显示,除咪达,它的MH+离子与(MH-35)+离子合并成一个峰。值得注意的是,醋丁洛尔和美托洛尔均与PEG发生共流出,因而二者更容易受到血浆样品中残留PEG产生的离子抑制的影响。图2为PEG的两个色谱图。A图显示未经过SPE处理的血浆样品中PEG含量情况。它是将PEG后加标至萃取的最终血浆洗脱液中得到的。B图则为含有5 mg/mL PEG的血浆样品经标准MCX流程萃取得到的,该图表明血浆样品中几乎全部PEG 400都得以去除。图3显示为实验所用样品组的平均PEG峰面积,如图所示,采用MCX萃取,超过99%的PEG 400得以去除。

  按照前文方法的方程式计算分析物回收率。如图4A所示,采用标准MCX流程后,每种分析物的回收率都超过80%。而对这四种分析物而言,平均回收率则达到95%。如图4B所示,血浆中含有的5 mg/mL PEG 400对于分析物回收率并无影响。在含有PEG的情况下,平均回收率为103.6%。

  将PEG 400从血浆中去除的主要目的就是为了清除可能引发的离子抑制效应。图5为由下面方程式得出的基质效应数据一览,据最新AAPS论文报道6。

  图表A所示数据来源于经Oasis MCX萃取去除PEG的血浆样品。图表B所示数据来源于经萃取后又加入PEG的血浆样品,可以看到在样品制备过程中未去除PEG的结果。由图显示,若未去除PEG,醋丁洛尔和美托洛尔受到严重的离子抑制作用影响,基质效应因子分别为0.45和0.77。由上述数据可以清晰看出,那些与PEG峰共流出的分析物,使用Oasis MCX SPE板去除PEG后,离子抑制效应能得以有效清除。经PEG去除后,最终醋丁洛尔和美托洛尔的基质效应因子分别为0.93和1.04。

  Oasis MCX 96孔板提供了一种用于去除血浆样品中高浓度PEG的简便、快捷、高效的方法,从而消除早期药代动力学研究中常见的基质效应(通常是离子抑制效应)。此外,该解决方案无需进行色谱分析方法的再开发、样品的稀释、及其他费时费力的流程即可成功解决上述问题,这使得整个解决方案广泛适用于高通量分析的应用。

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